今天要聊的話題,培養細胞的小伙伴肯定不會陌生生:那些讓細胞健康茁壯成長的常用試劑——動物血清!
血清在細胞培養中有點兒像細胞的“大廚”,它們提供必需的養分、生長因子和抗體,讓細胞們可以在培養皿里開心地跳舞。那么,不同種類的血清到底適用于哪些細胞培養呢?今天就來一場“血清全攻略”,一探究竟!
一
血清的概述
細胞培養實驗中,血清是一種關鍵的培養輔助物質。
它是從血液中提取出來的液體,血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后,分離出的淡黃色透明液體(理論上)或指纖維蛋白原已被除去的血漿。
血清的其主要作用是提供基本營養物質、激素和各種生長因子、結合蛋白、促接觸和生長因子,使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞起到某些保護作用。
在細胞培養中,我們通常將血清添加到培養基中,以創造一個理想的細胞生長環境。
二
血清的分類
動物不同,分離出的血清也會有所不同。
物種來源相同的血清,根據采血時間、血源品質也會分出不同的類別。
有些時候,根據實驗需求,還要對血清進行一些特殊的加工。
因此,市面上的血清種類也越來越多。
1牛血清
根據采血時間的不同,可分為以下幾種:
【胎牛血清】(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS):是采自5-8個月胎齡牛胚胎。【新生牛血清】(Newborn Calf Serum,簡稱NBCS):0—7天內(也有說法是0—30天內);
【小牛血清】(Calf Serum):采自出生30天——1年的小牛。
【成牛血清】(Adult Bovine Serum,簡稱ABS):采自成年牛收全血后分離得到血清。
合格的血清產品,需要嚴格控制采血時間點,才能保證最基本的血清質量。以胎牛血清為例:
一旦牛胎齡過長,會導致補體系統逐漸發育完全,進而使制備的血清中含有補體,影響血清品質。另外,胎牛中各類生長因子也會隨著生長發育而逐漸喪失,進一步使血清品質下降。
實驗不是千篇一律的,根據不同的需求,有時候需要對血清進行一些“定制化處理”。
根據不同品質分為以下幾種:
根據內毒素含量不同,血清可以分為不同品質:
當血清中內毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;
當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清為優級胎牛血清;
當血清中內毒素含量≥ 25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清;
根據不同處理分:
透析胎牛血清:透析過濾去除10000D以下小分子(如次黃嘌呤和胸腺核苷),避免外源小分子對細胞產生干擾。適合脈沖示蹤實驗(例如同位素標記特定小分子,并加入到培養體系中,以研究細胞代謝),也適合轉染CHO后的篩選等應用。
去外泌體血清:通過超速離心法或純化柱,去除絕大部分外泌體的血清,適用于外泌體相關細胞實驗研究。
超低lgG的血清:使用親和層析等工藝,去除IgG,使其水平低于要求值,可用于抗體、病毒和病毒反應以及細胞表面抗原表位相關研究。
活性炭/葡聚糖處理的血清:可降低血清中類固醇激素的濃度,例如雌二醇、孕酮、皮質醇、睪酮、T3 和 T4。適用于相關激素研究的實驗。
2
馬血清
馬血清一般分為兩種:
第一種馬血清含有的大分子蛋白比較多,適用于蛋白封閉;
第二種馬血清為細胞培養級別。它經過多次過濾,祛除了許多大分子蛋白,但保留了血清中促細胞生長的活性因子,因而能用于細胞培養,例如神經細胞培養時,培養基中則需要添加馬血清。
優質的馬血清來自健康馬血液,為封閉系統內無菌采血過濾而成,超低內毒素,無溶血,無異物,無細菌、真菌、支原體、噬菌體等。
3
豬血清
豬血清,常用于豬肺炎支原體疫苗的生產。
在對細胞和活疫苗進行支原體檢驗中,《獸藥典》也明確推薦了豬血清作為支原體檢驗用液體培養基的組成成分。
并且,《獸藥典》指出在【豬支原體肺炎微量間接血凝試驗】和【豬支氣管敗血波氏桿菌凝集試驗】中需要陰性血清,即優質的豬血清,血源必然來自健康動物。
1989年左右,也有國外學者建議用豬血清取代牛血清,用于培養制造非洲豬瘟病毒的細胞(見《動物檢疫》 1991年01期《豬血清中的牛血清白蛋白抗體引起非洲豬瘟血清學診斷的假陽性反應》),原因是牛血清中的白蛋白會干擾非洲豬瘟抗體的檢測,造成假陽性反應。
4
其他動物源血清
兔血清:
兔血清通常從六個月或更小的動物身上收集,可用于與 BSA 結合用作免疫細胞化學[1]和免疫組織化學中的封閉血清[2]。
山羊血清:
多用做封閉液,也有一些研究人員發現,優質的山羊血清可用于某些細胞的培養[3][4]。
雞血清:
從屠宰供人類食用的健康雞中收集的。有研究用于血清維生素 B12 的放射性同位素稀釋測定[5]。
三
如何挑選合適的血清
在選擇血清時,需要考慮以下因素:
細胞類型:了解你的細胞類型對選擇合適的血清至關重要。不同類型的細胞可能需要不同種類的血清。
實驗目的:你的研究目的也會影響血清的選擇。不同血清可能含有不同的生長因子和抗體,適合不同類型的實驗。
質量和來源:選購高質量的血清。
為了選擇合適的血清,盡量進行小規模的試驗,以確保它能滿足實驗需求。因此供應商能否提供試用很關鍵。
在細胞培養中,血清是細胞健康生長的關鍵因素之一。通過了解不同種類的血清和選擇適合你實驗的血清,為科研工作打下基礎。